SLO ENG

Inštitut za farmakologijo in eksperimentalno toksikologijo
Korytkova 2
1000 Ljubljana

telefon: +386 1 543 7330
Faks: +386 1 543 7331
e-pošta:

Natisni Nastavitve

22.06.2018 20:47

Pretočni citometer

Pretočni citometer Cell Lab QUANTA SC MPL

1. Aplikacije
Cell Lab Quanta MPL je edinstven sistem, ki lahko sočasno meri tri fluorescence, stransko sipanje in Coulter volumen. Pomembne lastnosti Quante so kalibriran injekcijski pogon za natančno in absolutno štetje celic, večbarvna ekscitacija s pomočjo živosrebrne obločne svetilke, optimizirane za ekscitacije pri 366, 405 in 435 nm, poleg tega pa ima tudi ekscitacijo z 488 nm diodnim laserjem moči od 2 do 22 mW. Omenjena postavitev dovoljuje uporabo barvil, ki jih vzbudimo z UV svetlobo, kot so DAPI ali Hoechst za natančno obarvanje DNA. Sistem je opremljen s tremi  visoko občutljivimi fotopomnoževalkami z linearnimi in logaritemskimi ojačevalniki za razširjeno dinamično območje. Poleg tega je sistem opremljen tudi s fotodiodo in detektorjem volumna za stransko sipanje svetlobe ter merilnikom coulter volumna. Detektor za stransko sipanje je možno uporabljati v linearnem ali logaritemskem načinu, medtem ko volumski detektor uporablja linearni način.
Nekateri primeri aplikacij:
o Celična viabilnost  (uporaba barvil PI ali 7AAD)
o Apoptoza  in merjenje kaspaz (kombinacija barvil Aneksin V / FITCAneksin,…)
o Celični cikel: Analiza ploidnosti (DAPI, PI ,…)
o Analiza stranskih populacij zarodnih celic:  Hoechst33342
o Fosforilacija proteinov
o Imunofenotipizacija s tremi barvami 
o Analiza bakterij in drugih submikronskih organizmov
o Analiza fluorescentnih proteinov : GFP, YFP, CFP, AmCyan, DsRed
o CFP-YFP FRET analiza
o Viabilnost spermijev 
o Identifikacija morskih organizmov
o Analiza rastlinske ploidnosti 
o Multipleksna analiza s FlowCytomix

2. Specifikacije aparata
a. Rokovanje z vzorci: spiralna postaja za zadrževanje biološko nevarnih snovi z vakuumom za spiranje sonde in preprečitev prenosa med vzorci; ploščice in tubice: mikrocentrifugirke, tubice za Vi-Cell, mikrotitrne ploščice z 24, 96 in 384 luknjicami z okroglim, ovalni ali ravnim dnom, globoke ali plitve; možnost prenos med vzorci <1.0%.
b. Velikost vzorca: minimalna: 25 µL, maksimalna: 300 µL.
c. Hitrost: <20 sek/vzorec za 3000 dogodkov s Flow Check
d. Mešanje vzorcev: nizka, srednja ali visoka hitrost, 0 do 12 ciklov. Intenziteta stresanja: 0-6, čas 5-30 sekund.
e. Prenos reagentov: neomejen prenos 1-1250 µL iz katerekoli luknjice ali tubice v katerokoli luknjico ali tubico. - Prilagodljivo razredčenje vzorcev. Izbor katerega koli načina stresanja ali med prenosom reagentov ali vzorcev.
f. Štetje: natančnost: +/- 5%, ponovljivost: koeficient variacije<5%, koncentracije: 3 x 104 do 2 x 106.
g. Lastnosti fluorescence: zajem podatkov z uporabo DSP in prikaz na uporabniško izbirni linearni ali 4 dekadni logaritemski skali; ločljivost: HPCV fluorescence  <3.0% za kalibracijski standard obarvan z DAPI ob uporabi živosrebrne svetilke; HPCV fluorescence  <3.0% za Flow Check fluorosfere ob uporabi 488nm diodnega laserja.
h. Način ločevanja delcev: po velikosti z elektronsko impedanco z območjem meritve med 3 in 40um premera s standardno 125 um pretočno celico.
i. Optične lastnosti: ekscitacija: živosrebrna obločna optimizirana za 366, 405  in 435nm ter 488 nm diodni laser nastavljiva med 2 in 22 mW; detektorji fluorescence: 3 visoko občutljive fotopomnoževalke s širokim območjem občutljivosti; optična poravnava: računalniško podprta in nadzorovana; optična sklopitev: 1,25 NA imerzijski objektiv; emisijski filtri: standarden komplet 460BP, 525BP, 575 BP in 670 LP.
j. Merljivi parametri: elektronski volumen, stransko sipanje, čas, tri barvna detekcija z log in lin skalo ter FC/FSD opcijo.
k. Pretočne specifikacije: patentirana 125um trikotna pretočna celica.
l. Dostavni sistem: vakuumska črpalka/ motorizirana injekcijska črpalka - 20 µL, maksimalna hitrost vzorčenja UV-DAD: do 40Hz.
Več podatkov na medmrežju: https://www.beckmancoulter.com/eCatalog/Catalog/Flow_Cytometry/Instruments_and_Software

3. Cenik dela (po dogovoru)
V skladu s 45. členom Pravilnika o ocenjevanju in financiranju raziskovalnih in infrastrukturnih programov (Ur.l. RS št. 23/08) velja nižja cena za članice UL za izvajanje javne službe in JRO ter RO za izvajanje projektov sofinanciranih iz javnih sredstev

4. Pogoji dostopa skladno s 45. členom Pravilnika o ocenjevanju in financiranju raziskovalnih in infrastrukturnih programov (Ur.l. RS št. 23/08).
Predhodni dogovor z eno od kontaktnih oz. odgovornih oseb, kjer se opredeli časovni termin analize, priprava vzorca, vrsta meritve ter cena za opravljeno delo.
Zaradi specifičnosti opreme mora biti pri uporabi aparata ves čas prisotna ena od odgovornih oseb za raziskovalno opremo.
Pretočni citometer je last programskih skupin P3-0067  in P3-004, ki sta lastnici instrumenta v enakovrednem deležu.  Po dogovoru imajo do laboratorija in uporabe instrumenta prost dostop določeni člani obeh skupin v okviru Pravil uporabe.
 
5. Kontaktni osebi
1) asist. dr. Katarina Černe (odgovorna oseba za raziskovalno opremo), Inštitut za farmakologijo in eksperimentalno toksikologijo, ULMF; e-mail: katarina.cernemf.uni-lj.si
2) doc.dr. Tomaž Marš, Inštitut za patološko fiziologijo, ULMF; e-mail: tomaz.marsmf.uni-lj.si
 

Vrazov trg 2, 1104 Ljubljana, Slovenija -- telefon: +386 1 543 7700, faks: +386 1 543 7701 -- e-pošta:

Vse pravice pridržane.

Creatoor Group izdelava spletnih strani